Cultivo de la línea celular HEp-2: doblaje poblacional y coloración con Giemsa. Perspectivas para el estudio de la infección con Chlamydia trachomatis

Cultivation of the cell line hep-2: dubbing of population and coloring with Giemsa

Los cultivos celulares se han convertido en herramientas esenciales para la investigación básica. Se aplican en inmunología, virología, biología molecular, ingeniería genética y farmacología, entre otras áreas. Se usan también en procesos industriales farmacéuticos, en técnicas de diagnóstico clínico y para estudio de trasplante de tejidos. En bacteriología, estos cultivos permiten confirmar una infección, evaluar la eficiencia de antimicrobianos, realizar estudios de infectividad, investigar sobre nuevas especies, obtener gran cantidad de microorganismos no cultivables para optimizar técnicas y examinar las relaciones entre la célula huésped y los  icroorganismos intracelulares (virus, bacterias y parásitos).

La línea celular HEp-2 (Human Epidermoid Cancer Cells) es utilizada en estudios de infección con diferentes bacterias, entre ellas Chlamydia trachomatis (CT), con el fin de determinar los mecanismos por los cuales este patógeno sobrevive en la célula huésped. También se emplea para observar la acción de péptidos antimicrobianos y de extractos para combatir la infección causada por dicha bacteria. Para este estudio se realizaron curvas de crecimiento en la línea celular HEp-2 con medios DMEM-F12 y MEM. Se estandarizó, además, la coloración con Giemsa y se calculó el doblaje poblacional con diferentes inóculos para evaluar el desarrollo de la línea celular en cultivo y seleccionar las condiciones óptimas para realizar futuros ensayos de infección con parásitos intracelulares, en particular con CT serovar L2.

1. Draganov M, Fransazov S, Draganov D, Murdjeva M, Popov N. Two new serum free and protein free cell strains, derived from HEp-2 cell line: cultural conditions and proliferation activity. Journal of Culture Collections 2009;6(1):112-21.
2. Hotez PJ, Bottazzi ME, Franco-Paredes C, Ault SK, Periago MR. The neglected tropical diseases of Latin America and the Caribbean: a review of disease burden and distribution and a roadmap for control and elimination. PLoS Negl Trop Dis 2008;2(9):e300.
3. Cervantes E. Infecciones causadas por Chlamydia trachomatis. Rev Fac Med UNAM 2009;52(1):18-22.
4. Kubo T, Ishida K, Matsuo J, Nakamura S, Hayashi Y, Sakai H, et al. Chlamydia trachomatis serovar L2 infection model using human lymphoid Jurkat cells. Microb Pathog 2012 Jul;53(1):1-11.
5. López E. Estudio de las características del ciclo de desarrollo de Chlamydia trachomatis relacionadas a la presencia del plásmido 7.5 Kb Instituto Politecnico Nacional; 2009.
6. Kameswaran TR, Ramanibai R. Indirubin-3-monooxime induced cell cycle arrest and apoptosis in Hep-2 human laryngea carcinoma cells. Biomed Pharmacother 2009 Feb;63(2):146-54.
7. Wiedeman JA, Kaul R, Heuer LS, Thao NN, Pinkerton KE, Wenman WM. Tobacco smoke induces persistent infection of Chlamydophila pneumoniae in HEp-2 cells. Microb Pathog 2004 Sep;37(3):141-8.
8. Hao H, Aixia Y, Dan L, Lei F, Nancai Y, Wen S. Baicalin suppresses expression of Chlamydia protease-like activity factor in Hep-2 cells infected by Chlamydia trachomatis. Fitoterapia 2009 Oct;80(7):448-52.
9. Life Technologies Corporation. PrFont34Bin0BinSub0Frac-
10. Def1Margin0Margin0Jc1Indent1440Lim0Lim11.http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/support/Product-Technical-Resources/media_formulation.1.html. 20-2-2013. Ref Type: Online Source
11. Sigma. ttp://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/ Formulation/m4655for.Par.0001.File.tmp/m4655for.pdf. 20-2- 2013. Ref Type: Online Source.
12. Invitrogen.http://www.jbc.org/content/suppl/2009/02/26/ M900773200.DC1/Schmidetal_Supplements.pdf. 20-2-2013. Ref Type: Online Source.
13. Skinner MC, Kiselev AO, Isaacs CE, Mietzner TA, Montelaro RC, Lampe MF. Evaluation of WLBU2 peptide and 3-O-octylsn-glycerol lipid as active ingredients for a topical microbicide formulation targeting Chlamydia trachomatis. Antimicrob Agents Chemother 2010 Feb;54(2):627-36.
14. Lazarev VN, Polina NF, Shkarupeta MM, Kostrjukova ES, Vassilevski AA, Kozlov SA, et al. Spider venom peptides for gene therapy of Chlamydia infection. Antimicrob Agents Chemother 2011; Nov;55(11):5367-9.
15. Life Technologies Corporation. HYPERLINK "http://www. invitrogen.com/site/us/en" http://www.invitrogen.com/site/ us/en home/support/Product-Technical-Resources/media_ formulation.1.html. 20-2-2013. Ref Type: Online Source.
16. Invitrogen. HYPERLINK "http://www.jbc.org/content/ suppl/2009/02/26" http://www.jbc.org/content/ suppl/2009/02/26 M900773200. / Schmid etal _Supplements. pdf. 20-2-2013. Ref Type: Online Source.
17. López E. Estudio de las características del ciclo de desarrollo de Chlamydia trachomatis relacionadas a la presencia del plásmido 7.5 Kb Instituto Politecnico Nacional; 2009.
18. Sasiaín J, Instituto Nacional de Salud (Colombia). Reseña de "cien años del colorante Giemsa". Biomédica 2003 Mar;23:5-18.
19. Lazarev VN, Polina NF, Shkarupeta MM, Kostrjukova ES, Vassilevski AA, Kozlov SA, et al. Spider venom peptides for gene therapy of Chlamydia infection. Antimicrob Agents Chemother 2011 Nov;55(11):5367-9.
20. Yasin B, Pang M, Lehrer RI, Wagar EA. Activity of Novispirin G-10, a novel antimicrobial peptide against Chlamydia trachomatis and vaginosis-associated bacteria. Exp Mol Pathol 2003; Apr;74(2):190-5
21. -----------------------------------------------------------------------------------
22. DOI: http://dx.doi.org/10.22490/24629448.1836